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[Lipoinyección: Conceptos básicos y aplicación clínica - Dr. Manuel Meruane N.]
Células madres derivadas del tejido adiposo
El tejido adiposo ha emergido en los últimos 15 años como
una excelente fuente de células aptas para ingeniería tisular
y terapias regenerativas. El tejido adiposo más que un mero
soporte de órganos, es un tejido complejo y dinámico que
envuelve diversos procesos fisiológicos y patológicos. En
los años 60, Rodbell (14) describe la separación del tejido
adiposo en sus componentes celulares, lo que ha permitido
comprender la existencia de células precursoras de adipositos
y sus programas de diferenciación (15, 16). En el año 2001
Zuk y cols. muestran al tejido adiposo como una nueva fuente
células madres mesenquimales con potencial de diferencia-
ción multilinaje (11).
Las células madre derivadas del tejido adiposo (ASCs) se
encuentran rodeando los vasos sanguíneos y en el tejido
conectivo del tejido adiposo humano. Estas células estromales
no lipídicas, se obtienen de la digestión enzimática del tejido
adiposo y luego centrifugación (Figura 2), el pellet celular
obtenido se compone de tipos celulares heterogéneos y se
denomina fracción vascular estromal (SVF). Si las células del
SVF son cultivadas a 37°C con 5% de CO
2
por más de 8 horas,
las células adheridas a la placa de cultivo corresponderán a las
ASCs, las células no adherentes son eliminadas con solución
buffer fosfato (Figura 3). Para expandir el número de ASCs se
puede mantener las células en cultivo con un medio estándar
consistente en DMEM (
Dulbecco´s Modified Eagle Medium
)
con 10% de suero y 1% de antibióticos. Una vez en cultivo,
se pueden agregar diferentes factores de crecimiento u otros
aditivos para apreciar la diferenciación a un linaje celular espe-
cífico como tejido adiposo, cartílago, hueso o músculo (17).
A las ASCs se las categoriza dentro del grupo de las células
estromales mesenquimáticas multipotentes (
mesenchymal
stem cells o MSCs
) que corresponden a células madres obte-
nidas de tejido adultos. La Sociedad Internacional de Terapia
Celular (ISCT) ha establecido criterios para poder denominar a
una célula como MSC. Primero las MSC deben ser adherentes
al plástico en condiciones de cultivo estándar. Segundo, 95%
de las MSC medido por citometría de flujo debe expresar
CD105, CD73 y CD90 y perder la expresión (2% positivo) para
CD45, CD34, CD14 o CD11b, CD79a o CD19 y HLA clase II.
Tercero estas células deben ser capaces de diferenciarse en
osteoblastos, adipocitos y condroblastos en condiciones de
cultivo estándar (18) (Tabla 1).
FIGURA 2. digestión enzimática de la grasa
A la izquierda se observa el tejido adiposo luego la digestión enzimática
con colagenasa. A la derecha se aprecia el contenido luego de la centrifu-
gación, el pellet contenido en el fondo del tubo corresponde a la fracción
vascular estromal (SVF).
FIGURA 3. Células adherentes a la placa de
cultivo, caracterizadas por su forma de huso
Tabla 1. Criterios para Identificar MSC
1.
Adherencia al plástico en condiciones de cultivo
estándar
2.
Fenotipo
Positivo (
≥
95%)
Negativo (
≤
2%)
CD105
CD45
CD73
CD34
CD90
CD14 o CD11b
CD79
α
o CD19
3.
Diferenciación in Vitro: osteoblastos, adipositos,
condroblastos (demostrado por tinción del cultivo celular)
(Dominici el al.) ref 18.
Existen múltiples estudios preclínicos que evidencian el
potencial regenerativo de las ASCs (17), ya sea por diferen-
ciación directa en múltiples tejidos con el uso de factores de
crecimiento o por un efecto estimulador paracrino de angio-
génesis y proliferación celular (19, 20).