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En cuanto a la
detección de la partícula viral completa,
las técnicas de aislamiento viral o microscopia electrónica
sólo están disponibles en laboratorios especializados en
virología y se encuentran generalmente reservadas para
fines de investigación. Estas técnicas clásicas han sido
reemplazadas en la práctica clínica por técnicas molecu-
lares o inmunoensayos que requieren menor infraestructura
e implican un menor tiempo en la entrega de resultados.
La característica de los virus de ser parásitos intracelulares
implica que para el aislamiento viral se deban utilizar líneas-
cultivos celulares, los cuales son “infectados” por el virus
viable presente en la muestra y tras lo cual se observan los
cambios morfológicos de las células hospederas o efectos
citopáticos, como consecuencia de una replicación viral
efectiva (Figura 2). Todo aislamiento viral debe ser confir-
mado mediante técnicas de inmunodiagnóstico (inmu-
nofluorescencia) o moleculares específicas, debido a que
ningún efecto citopático es patognomónico de un virus
en particular. Una de las mayores ventajas del aislamiento
viral es la posibilidad de obtener altas concentraciones de
virus completo, para posteriores estudios de caracteriza-
ción genómica y antigénica, de sensibilidad antiviral y para
conservación en biorepositorios.
Figura 1. TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO VIRAL
Partícula viral
Genoma viral
Antígenos virales
Respuesta inmune
específica antiviral
Microscopía electrónica
Aislamiento viral
ELISA
Inmunofluorescencia
Western blot
Inmunoanálisis:
Inmunofluorescencia
ELISA
Radioinmunoanálisis
Inmunoaglutinación
Inmunocromatografía
Técnicas de amplificación de ácidos nucleicos:
•
PCR o RT- PCR
•
PCR en tiempo real
Secuenciación
Para detectar
antígenos virales
disponemos de múltiples
técnicas de inmunoanálisis, las cuales se basan en la espe-
cificidad de la
reacción antígeno-anticuerpo.
En todas estas
técnicas es necesario conocer el antígeno a detectar, de
manera de definir el anticuerpo específico para dicho fin.
La detección puede realizarse mediante métodos directos o
indirectos. Como se muestra en la Figura 3, en el
método
directo,
el anticuerpo específico contra el antígeno a
detectar está acoplado a un marcador. En el
método
indirecto,
el anticuerpo anti-antígeno no posee marcador,
y la formación del complejo antígeno-anticuerpo se
evidencia mediante un segundo anticuerpo marcado,
llamado
anticuerpo secundario conjugado.
De esta forma, la
denominación de las técnicas de inmunoanálisis se basa en
el tipo de marcador utilizado para evidenciar la unión del
anticuerpo con el antígeno:
• Inmunoflorescencia:
el anticuerpo está unido a una
molécula que emite fluorescencia (Figura 4).
• Radioinmunoanálisis:
el marcador en este caso es un
isótopo radioactivo.
• ELISA (ensayo inmuno enzimático):
el anticuerpo está
acoplado a una enzima que al reaccionar con un sustrato
produce un producto coloreado visible.
[REV. MED. CLIN. CONDES - 2015; 26(6) 744-752]