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rutina. No fue hasta la década de los 80´donde para muchos
el mayor invento científico de la biología molecular originó
un punto de inflexión en el diagnóstico molecular.
La reacción de la polimerasa en cadena (RPC)
“….One friday night I was driving, as was my custom, from
Berkeley up to Mendocino where I had a cabin far away from
everything off in the woods. My girlfriend, Jennifer Barnett, was
asleep. I was thinking. Since oligonucleotides were not that hard
to make anymore, wouldn’t it be simple enough to put two of
them into the reaction instead of only one such that one of them
would bind to the upper strand and the other to the lower strand
with their three prime ends adjacent to the opposing bases of
the base pair in question….”.
El párrafo citado corresponde a un
fragmento del discurso del bioquímico Kary B. Mullis al recibir
el premio Nobel de química en el año 1993 por diseñar la
reacción de la polimerasa en cadena (RPC), quizás el mayor
Tabla 2. Tipos de RPC, características y aplicaciones
Tipo de RPC
Características
Aplicaciones
RPC Estándar
Amplificación de un segmento de
ADN utilizando dos partidores.
La detección de la amplificación es
mediante geles de agarosa.
Detección cualitativa de un segmento de ADN.
RPC Múltiple
Amplificación de 2 o más
segmentos de ADN utilizando varios
partidores en un sola reacción de
amplificación. La detección de la
amplificación es mediante geles de
agarosa.
Detección cualitativa de varios segmentos de ADN
en una sola reacción de RPC
RPC-RFLP
(
Restriction
fragment length
polymorphisms
)
RPC estándar con paso posterior
de digestión con enzimas de
restricción.
Detección de polimorfismos genéticos (SNPs).
RT (
Reverse
transcriptase
)-RPC
Síntesis de cADN a partir de ARN
mediante transcripción reversa,
seguido de una RPC.
Expresión de genes.
Detección de virus ARN.
RPC-TR (
Real time
) o
qRPC
RPC estándar donde se utilizan
tinciones o sondas con fluoróforos
para la detección de los fragmentos
amplificados.
Puede ser del tipo multiplex.
Detección cualitativa de uno o varios segmentos
de ADN.
Cuantificación de ADN en la muestra (cargas) o
expresión de genes (asociada a una reacción de
transcripción reversa).
aporte en la era del diagnóstico molecular (Saiki y cols.,
1988). De forma general, esta técnica permite la amplifica-
ción de una región específica de ADN utilizando partidores o
secuencias de ADN que delimitan la zona de amplificación.
A partir de una copia de la región a amplificar se obtienen
millones de copias, lo que permite su detección y de esta
forma se evidencia la presencia de la región de ADN en una
muestra determinada. Dada la naturaleza de la técnica, la
alta especificidad de la RPC viene dada por la hibridación de
los partidores complementarios a la secuencia blanco y su
elevada sensibilidad a la baja cantidad de ADN que requiere
para iniciar la amplificación.
Desde su invención, se han descrito varias variantes de la RPC
que han optimizado el diagnóstico clínico. En la tabla 2 se
detallan las variantes de RPC más utilizadas en el diagnóstico
clínico, destacando sus principales características y aplica-
ciones.
[REV. MED. CLIN. CONDES - 2015; 26(6) 788-793]